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实验设计常问解答

关于NMT实验设计的常见问题与解答

什么是测试液?及其重要性?

测试液指样品测定过程中所处的液体环境。只有符合技术要求的测试液才可以在测试过程中得到可以真实反映样品特性的实验数据,得到准确的实验结果。

什么是符合技术要求的测试液?

(1)测试液可以保证非损伤微测系统正常工作。

(2)测试液尽量维持一定的渗透压和pH值,以保证样品的活性。

《NMT101问》中的NH4+NO3-测试液配方和之前提供的表格中的配方不一样,哪个是正确的?

两个配方都是可以使用的,101问的是SCI文章中用过的,表格中的是全国各创服中心专家总结出来的,老师可以参考使用。

样品的培养方式应该用什么?

由于测试过程是在液体环境中,样品的最理想培养条件为水培或者是土培后再进行水培发根。这样培养的样品表面干净,表面附着的物质可以通过在测试液中平衡处理去除,保证测试数据的稳定性和准确性。

样品的选取有要求么?

在实验过程中最好选取形态比较一致的材料进行实验,避免测试过程中使用状态不好的样品。只有保证了实验材料的一致性才能更好地保证实验数据的一致性。

Na+外排实验测试液只有NaCl,成份过于简单,是不是对样品不好,我引用之前既有NaCl,也有氯化镁、氯化钾的测试液的文献,审稿人会不会质疑?

(1)文献中的复杂溶液,也是我们这定的,是以往的做法,设计的比较复杂。经过这几年的积累、分析,我给您的测试液是优化后的结果。

(2)以前设计的复杂,目的是想模仿培养基成份,后来发现没有必要,因为检测时间较短,植物在测试液中没有生长的需求,最重要的是能显示出我们关注的生理功能(例如此次实验的排Na+),简化后干扰更小,结果更准确。

(3)之前文献里的测试液大胆的引用,我这里目前关于测试液的审稿人质疑里,没有收到过此类问题,您放心用。即使提出来,我这里保证给您解决。

保卫细胞检测,需不需要分离原生质体?

保卫细胞检测不需要分离原生质体,检测时是活体原位检测,不需要接触细胞,和接触式的膜片钳、电压钳这些传统电生理的技术,原理不同。

瞬时处理预实验要是失败了该如何调整?

(1)如果只是校正值、经验电位有偏差,但偏差不是太离谱的话:

1)提升测试液、校正液中的待测离子浓度;

2)降低瞬时处理试剂浓度;

(2)如果校正值、经验电位差的非常多:

采用短时预处理的方式,即使用处理试剂短暂处理样品(1分钟内),然后将样品快速置于不含该处理试剂的测试液中检测

这个文章里好像不是用NMT测的?

NMT出来的文章太多,我们经手的实验有限,不好判断是不是NMT做的。不过您看到的跨膜离子流文章,95%是用旭月公司的设备(经过联盟认证),其中又有70%是用我们的测试服务做出来的数据。

保卫细胞测试液有什么特殊要求吗?

保卫细胞的测试液中必须要有的成分:CaCl2KClCa2+K+Cl-);

保卫细胞测试液:

2.0mM KCl + 0.1mM CaCl2 + 5.0mM MES,pH6.0(可测K+Ca2+Cl-

2.0mM KCl + 0.1mM CaCl2 + 5.0mM MES,pH6.0(可测H+

测试液中必须有的成份有哪些?

Ca2+,一般用CaCl2

同一个实验,如果检测多种指标,可以针对不同指标,设计不同测试液吗?

不可以。要求同一个测试液测这几种不同的指标。如果出现K+NH4+这种同时测,且其中一个指标(K+)对另一个传感器(NH4+)有干扰的情况,则可以设计不同的测试液。

如果测试液中待测离子的浓度,已经出了操作手册里该离子浓度的上下限,如何处理?

Cu2+为例。培养液中的Cu2+为0.01mM,为了使测试液成分尽量和培养环境一致,测试液中的Cu2+浓度也需要是0.01mM,但是操作手册中Cu2+的校正上下限为0.05-10mM,此时测试液中的离子浓度不在范围。

针对这种情况的特殊规定是,测试液中的离子浓度在校正下限的1/10以内(下限是0.05,1/10也就是0.005),或者在校正上限的10倍以内(上限是10,10倍就是100),是可以接受的。此时高浓度或者低浓度校正液的浓度,就得压着校正上限或者下限。例如,测试液是20mM,高低浓度校正液为10/1.0 mM,两点校正即可。

霍格兰营养液、MS培养基里的Ca2+浓度分别是多少?

霍格兰:4mM

MS培养基:3.1mM

测试液设计需要注意什么?

(1)样品处理时常在1h以内,设计测试液时需要在测试液中加入处理的药剂(用什么药剂处理的测试液中就加入什么)

(2)测试液中Na+容易受K+的影响(但K+不会受到Na+的影响),测Na+时,溶液中的K+浓度不可高于Na+浓度的1/10(1mM Na+→0.1mM K+

检测叶肉细胞一般平衡4h,如果检测的不是叶肉细胞,检测的是叶片表面(非切口部位)那需要平衡多久?

叶片撕下后,一般检测叶肉细胞需要平衡4h,但是如果不检测切口(暴露出的叶肉细胞),检测的是叶片表面,平衡25min后数据基本稳定,没有明显波动,表明平衡25min后叶片切口对检测位点没有影响。

测不到铵硝吸收怎么办?

根据您的实验进行针对性优化!大概方向如下,可以进行增减:

①一个扫点实验,整条根选择多个点进行检测,看一下吸收最大的地方。

②测试液提前一天配好;

③可以氮饥饿之后直接测,也可以不选择氮饥饿(这种就是反映样品的实际吸收情况)

④氮源如果是硝酸钾那测试液成分就选择硝酸钾,如果是硝酸钙,测试液成分最好也进行修改。

盐胁迫测Na+吸收或者外排的测试液是什么?

Na+外排,测试液1mM NaCl,0.1mM CaCl2,pH6.0

Na+吸收,200mM NaCl处理半小时,测试液50mM NaCl,0.1mM CaCl2,pH6.0,不需要平衡,放入测试液中直接开始测(如果用200mM NaCl当测试液,背景浓度太高,干扰太大)

高盐胁迫测Na+K+Cl-的测试液是什么?

Na+吸收:50mM NaCl,0.1mM CaCl2,0.1mM KCl,pH6.0(NaCl处理时长不超过2h)

Na+外排:1mM NaCl,0.1mM CaCl2,0.1mM KCl,pH6.0

K+:200mM NaCl,0.1mM CaCl2,0.1mM KCl,pH6.0(NaCl浓度可以根据实际胁迫浓度进行更改)

Cl-:如果盐胁迫下,Cl-Na+一样,都是内吸然后外排,直接参考Na+吸收、外排检测体系即可

做高铵胁迫的测试液怎么设置?

做植物营养的,如果出现氨浓度大于5mM,属于高铵处理,需要根据您是做营养吸收的还是做高铵胁迫的,如果是营养吸收,测试液就跟处理浓度一致即可,如果是做高铵胁迫的,一般测试液里的铵根要设置成低浓度的(0.1mM),铵毒害一般测的都是铵根外排,所以要选择低浓度的铵根,另外铵外排检测时的样品平衡时间也需要尝试,比如平衡20min检测一下、平衡40min检测一下,看看平衡多久能检测到持续稳定的铵外排。